比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等;ELISA试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。ELISA生物试验是一种敏感性高,异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
ELISA的主要常用类型及步骤
1.间接法测抗体
间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(二抗)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:
1、将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原,洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2、加稀释的样本,保温反应。样本中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,样本中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3、加酶标抗抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗抗体结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与样本中受检抗体的量正相关。
4、加底物显色。
4、竞争法测抗原
为了保证ELISA试剂盒实验质量,我们需要掌握一些小技巧以助于实验的成功,那么ELISA试剂盒的操作技巧您知道吗?
如若掌握了这些实验技巧之后,在做ELISA实验中,试验起来会更熟练,大大的降低了实验过程中的风险,ELISA试剂盒实验的入门新手掌握了这些知识后,操作起来都会快的多。
1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
2.合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
3.在吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
4.务必做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
5.样品稀释液应用加液器加注,并经常校对其准确性。
6.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
7.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。
8.ELISA试剂盒实验中,加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
9.剩余样品及废弃物应经℃高压蒸汽灭菌30分钟,或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。
10.人ELISA试剂盒洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。